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外泌體(Exosome)是由細胞分泌而來(lái)的微小囊泡,直徑約為30-200nm,密度在1.13-1.21g/ml,具有杯狀形態(tài)、雙層膜結構,天然存在于血液、尿液、唾液、母乳和細胞培養基等生物體液中。包括瘤細胞在內幾乎所有類(lèi)型的細胞(免疫細胞、神經(jīng)細胞、干細胞),都可以產(chǎn)生并釋放exosome。Exosome內含有與細胞來(lái)源相關(guān)的蛋白質(zhì)rRNA和microRNA,Exosome可通過(guò)細胞膜受體直接受體細胞,也可運輸蛋白質(zhì)、mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA,甚至細胞器進(jìn)入受體細胞,參與細胞間通訊。Exosome在免疫應答、炎癥反應、血管生成、凋亡、凝血和廢物處理等生理過(guò)程發(fā)揮關(guān)鍵作用,不同細胞來(lái)源的exosome所含有的RNA和蛋白成分不盡相同,可作為多種疾病的早期診斷標記物,也能作為靶向藥物的載體進(jìn)行疾病如何高效地提取外泌體是實(shí)現這項新興液體活檢技術(shù)臨床常規化應用的關(guān)鍵。無(wú)錫外泌體提取試劑廠(chǎng)家批發(fā)價(jià)
外泌體的提取方法:1、磁珠免疫法。外泌體表面有其特異性標記物(如CD63、CD9蛋白),用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結合,即可將外泌體吸附并分離出來(lái)。磁珠法具有特異性高、操作簡(jiǎn)便、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點(diǎn),但是效率低,外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,不利于下游實(shí)驗,難以普遍普及。2、多聚物沉淀法。聚乙二醇(PEG)為常用的多聚物,可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結合共沉淀,早先應用于從血清等樣本中收集病毒,現在也被用來(lái)沉淀外泌體,其原理可能與競爭性結合游離水分子有關(guān)。利用PEG沉淀外泌體存在不少問(wèn)題:比如純度和回收率低,雜蛋白較多(假陽(yáng)性),顆粒大小不均一,產(chǎn)生難以去除的聚合物,機械力或者吐溫-20等化學(xué)添加物將會(huì )破壞外泌體等。珠海外泌體提取試劑廠(chǎng)家批發(fā)價(jià)這些試劑盒不需要特殊設備,隨著(zhù)產(chǎn)品不斷更新?lián)Q代,提取效率和純化效果逐漸提高。
外泌體(exosomes)是活細胞經(jīng)過(guò)"內吞-融合-外排"等一系列調控過(guò)程而形成的膜性囊泡,來(lái)源于晚期核內體(也稱(chēng)為多囊泡體),直徑約為30-150nm,密度在1.13-1.21g/ml,天然存在于血液、唾液、尿液及母乳等體液中,同時(shí)外泌體也存在于組織和細胞間隙中。人體中幾乎所有類(lèi)型的細胞均能產(chǎn)生外泌體,人體中大約有1014個(gè)外泌體,大約平均每個(gè)細胞產(chǎn)生1000-10000個(gè)。外泌體中含有核酸(DNA、miRNA、lncRNA、mRNA、tRF等)、蛋白和脂類(lèi),在細胞間物質(zhì)和信息轉導中發(fā)揮重要作用,研究表明其在干細胞、免疫調控、瘤轉移、血管生成以及生物標志物等領(lǐng)域都發(fā)揮著(zhù)不可替代的作用。
外泌體(Exosomes)是細胞分泌到胞外的一種囊泡(ExtracellularVesicles,EVs),其大小為30-150nm,具有雙層膜結構和茶托狀形態(tài),含有豐富的內含物(包括核酸、蛋白和脂質(zhì)等),參與細胞間的分子傳遞。外泌體普遍存在于細胞培養上清以及各種體液中,包括血液、唾液、尿液、乳汁等,同時(shí)也存在于組織樣本中,如腦組織、肌肉組織、脂肪組織等。腦組織分離方法簡(jiǎn)述:將腦組織剪成薄片,放入離心管中加上消化液進(jìn)行消化,經(jīng)水浴、反復輕輕上下顛倒,再用移液間斷緩慢吹吸至消化結束。隨后加入培養基于消化液中,混勻,置于冰上。再進(jìn)行一系列的差速超速離心過(guò)程,包括除雜、濾膜過(guò)濾、超離等。較后用PBS重懸外泌體,用重懸后的外泌體進(jìn)行下面的透射電鏡(TEM)、納米粒徑追蹤分子(NTA)和markerWB鑒定。同時(shí)對超速離心機的設備要求以及操作程序的培訓較大提高了提取成本。
人體內多種細胞及體液均可分泌外泌體,包括內皮細胞、免疫細胞、血小板、平滑肌細胞等。當其由宿主細胞被分泌到受體細胞中時(shí),外泌體可通過(guò)其攜帶的蛋白質(zhì)、核酸、脂類(lèi)等來(lái)調節受體細胞的生物學(xué)活性。外泌體介導的細胞間通訊主要通過(guò)以下三種方式:一是外泌體膜蛋白可以與靶細胞膜蛋白結合,進(jìn)而靶細胞細胞內的信號通路。二是在細胞外基質(zhì)中,外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切,剪切的碎片可以作為配體與細胞膜上的受體結合,從而細胞內的信號通路。有報道稱(chēng)一些外泌體膜上蛋白在其來(lái)源細胞膜上未能檢測出。三是外泌體膜可以與靶細胞膜直接融合,非選擇性的釋放其所含的蛋白質(zhì)、mRNA以及microRNA將人尿液來(lái)源細胞的培養基通過(guò)0.22微米濾膜過(guò)濾,以去除大的細胞殘片以及其它雜質(zhì)。天津正規外泌體提取試劑廠(chǎng)家批發(fā)價(jià)
外泌體是一種能被機體內大多數細胞分泌的直徑大約為30~150nm的具有脂質(zhì)雙層膜的微小膜泡。無(wú)錫外泌體提取試劑廠(chǎng)家批發(fā)價(jià)
外泌體(exosome),特指直徑在40-100nm的盤(pán)狀囊泡。其主要來(lái)源于細胞內內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體,經(jīng)多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中?,F已證實(shí)可以分泌外泌體的細胞有:肥大細胞、淋巴細胞、樹(shù)突狀細胞、瘤細胞、間充質(zhì)干細胞等。外泌體在免疫中抗原呈遞、瘤的生長(cháng)與遷移、組織損傷的修復等生理病理上起著(zhù)重要的作用。同時(shí),不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,可作為疾病診斷的生物標志物。細胞外囊泡是蛋白質(zhì)、mRNA、miRNA和脂質(zhì)運輸來(lái)完成細胞間通訊通路的重要媒介,根據它們的大小和發(fā)生分為三類(lèi),包括外泌體、微泡和凋亡小體。其中,外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡,由多種細胞分泌,內含有特定的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、細胞因子或遺傳物質(zhì)。來(lái)源于不同的組織的外泌體不光具有其特異性蛋白分子,而且還包含其行使功能的關(guān)鍵分子無(wú)錫外泌體提取試劑廠(chǎng)家批發(fā)價(jià)
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